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          液相色譜儀采用技術工作原理哪些?
          發布時間:2018-11-06   點擊次數:716次
               液相色譜儀只要求樣品能制成溶液,不受樣品揮發性的限制,流動相可選擇的范圍寬,固定相的種類繁多,因而可以分離熱不穩定和非揮發性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質。
           
              與試樣預處理技術相配合,HPLC所達到的高分辨率和高靈敏度,使分離和同時測定性質上十分相近的物質成為可能,能夠分離復雜相體中的微量成分。隨著固定相的發展,有可能在充分保持生化物質活性的條件下完成其分離。
           
              液相色譜儀的系統由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統,樣品溶液經進樣器進入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相) 內, 由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數, 在兩相中作相對運動時, 經過反復多次的吸附- 解吸的分配過程, 各組分在移動速度上產生較大的差別, 被分離成單個組分依次從柱內流出, 通過檢測器時, 樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀,數據以圖譜形式打印出來。
           
              液相色譜法的工作原理是儲液器中的流動相被高壓泵打入系統,樣品溶液經進樣器進入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相)內,由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數,在兩相中作相對運動時,經過反復多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動速度上產生較大的差別,被分離成單個組分依次從柱內流出,通過檢測器時,樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀,數據以圖譜形式打印出來。
           
              液相色譜分析法(HPLC),它的基本概念及理論基礎(如保留值、塔板理論、速率理論、容量因子、分離度等),與氣相色譜 是一致的,但又有不同之處:液相色譜 與氣相色譜的主要區別可歸結于以下幾點:
           
              進樣方式的不同:液相色譜只要將樣品制成溶液,而氣相色譜需加熱氣化或裂解;
           
              流動相的不同,在被測組分與流動相之間、流動相與固定相之間都存在著一定的相互作用力;
           
              由于液體的粘度較氣體大兩個數量級,使被測組分在液體流動相中的擴散系數比在氣體流動相中約小4~5個數量級;
           
              由于流動相的化學成分可進行廣泛選擇,并可配置成二元或多元體系,滿足梯度洗脫的需要,因而提高了液相色譜的分辨率(柱效能);
           
              液相色譜采用5~10Lm細顆粒固定相,使流體相在色譜柱上滲透性大大縮小,流動阻力增大,必須借助高壓泵輸送流動相;
           
              液相色譜是在液相中進行,對被測組分的檢測,通常采用靈敏的濕法光度檢測器,例如,紫外光度檢測器、示差折光檢測器 、熒光光度檢測器等;
           
              液相色譜與氣相色譜相比較,液相色譜同樣具有高靈敏度、能和高速度的特點。
           
              液相色譜儀的定性和定量分析,與氣相色譜分析相似,在定性分析中,采用保留值定性,或與其他定性能力強的儀器分析 法連用;在定量分析中,采用測量峰面積的歸一化法、內標法或外標法等,但液相色譜在分離復雜組分式樣時,有些組分常不能出峰,因此歸一化法定量受到限制,而內標法定量則被廣泛使用。

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