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          液相色譜儀的使用技巧分析
          發布時間:2019-04-24   點擊次數:683次
             液相色譜儀只需要將樣品制成溶液,不受樣品揮發性的限制。流動相選擇范圍廣,固定相種類多,可以分離熱不穩定不揮發、離解不離解、分子量范圍多樣的材料。
           
            結合樣品預處理技術,液相色譜所獲得的高分辨率、高靈敏度,使具有非常相似性質的物質的分離與同時測定成為可能,并使復雜相體中痕量組分的分離成為可能。隨著固定相的發展,液相色譜儀有可能在足夠的條件下完成生化物質的分離以保持其活性。
           
            液相色譜儀系統由儲液器、泵、采樣器、色譜柱、檢測器和記錄儀組成。累加器中的流動相是高壓泵入系統,樣品溶液進入流動相,取樣器是流動相在色譜柱(固定相),由于各種組件的樣品溶液兩個階段有不同的分配系數,相對運動的兩個階段,經過幾次的吸附-解吸過程中,組件的分布在移動速度上有很大的差異,將分離出的各個組分從柱狀逸出,通過檢測器,將樣品濃度轉換成電信號發送到記錄儀,數據以地圖的形式打印出來。
           
            液相色譜儀的工作原理是流動相在累加器是高壓泵入系統,樣品溶液進入流動相,取樣器是流動相在色譜柱(固定相),由于各種組件的樣品溶液兩個階段有不同的分配系數,相對運動的兩個階段,經過幾次的吸附-解吸過程中,各組分在移動速度上的分布有很大的差異,從逸出的色譜柱中分離出各個組分,通過檢測器,將樣品濃度轉換成電信號發送到記錄儀,數據以地圖的形式打印出來。
           
            LC液相色譜儀不適合溫度環境。通常,操作要求可在室溫下為5 ~ 35℃才能滿足。通常,濕度環境需要在20%到85%之間。在高濕度地區,當使用某些類型的氣相色譜儀時,由于環境濕度高,會降低氣相色譜儀的絕緣性能,如果操作靈敏度高,響應值會降低。員工在使用氣相色譜儀時,遇到上述現象應采取必要的措施。
           
            液相色譜儀系統由儲液器、泵、采樣器、柱、檢測器和記錄儀組成。累加器中的流動相是高壓泵入系統,樣品溶液進入流動相,取樣器是流動相在色譜柱(固定相),由于各種組件的樣品溶液兩個階段有不同的分配系數,相對運動的兩個階段,經過幾次的吸附-解吸過程中,組件的分布在移動速度上有很大的差異,LC液相色譜儀從色譜柱中分離出單獨的組分,通過檢測器,將樣品濃度轉換成電信號發送到記錄儀,數據以圖形的形式打印出來。液相色譜儀主要包括采樣系統、輸液系統、分離系統、檢測系統和數據處理系統。
           
            為LC液相色譜儀進樣口和檢測器類型選擇柱尺寸和墊片材料;避免重復使用氣相色譜儀墊片;使用合適的切柱工具(如陶瓷板或金剛石刀)切柱;在氣相色譜柱安裝進進樣口和檢測器之前,確保色譜柱清潔平整;應制造商要求安裝氣相色譜儀,并在進氣口與檢測器之間的適當距離插入色譜柱;氣相色譜柱必須置于色譜柱上,毛細管柱的任何部分不得接觸色譜柱壁。確保烘箱所有接頭在加熱前不漏水,載氣中無氧;通過注射檢查LC液相色譜柱是否安裝正確,不保留化合物或使用氣相色譜儀軟件程序,并設置載氣的線性流量。
           
            液相色譜儀的要求
           
            1、流動相在使用前必須用hplc級試劑進行過濾,以去除顆粒雜質和其他物質(用0.45 m或更細的膜過濾)。
           
            2、流動相過濾后,應采用超聲波除氣。脫氣后應在室溫下使用。
           
            3、不能使用純乙腈作為流動相,這樣會使單向閥卡住,導致泵無法進入液體。
           
            4、使用緩沖液時,樣品完成后立即用去離子水沖洗管道和柱1小時,然后用甲醇(或甲醇水溶液)沖洗40分鐘以上,使離子完全去除。對于柱塞棒的外部,樣品完成后也必須用20mL以上的去離子水沖洗。
           
            5、長時間不要使用本儀器,柱應取出并用插頭密封保存。注意,由于純水易發霉,柱體不宜用純水保存,應使用有機相(如甲醇等)保存。
           
            6、液相色譜儀完成樣品后,用樣品中溶解的溶劑清洗取樣器。
           
            7、C18柱不能用于蛋白質樣品、血液樣品和生物樣品。
           
            8、如果由于堵塞造成壓力過高,則在混合器管道過濾器單向閥中使用預柱過濾器進行檢查和清洗。清洗方法:
           
            9、氣泡會造成不穩定的壓力和較差的重現性,所以在使用過程中盡量避免氣泡。
           
            10、如果進液管內沒有液體,LC液相色譜儀應使用注射器吸液:通常在輸液前應清洗流動相。
           
            11、液相色譜儀注意液相色譜柱的pH值范圍。不要注入強酸或強堿樣品,特別是堿性樣品。
           
            12、更換移動相時,吸濾頭應放置在燒杯內,振動時清洗,然后插入新的移動相。非混相流動相應改為異丙醇。

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